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      支原體檢測試劑盒

      支原體檢測試劑盒

      產品型號:

      所屬分類:支原體試劑盒

      產品時間:2022-11-17

      簡要描述:支原體檢測試劑盒:
      (1)僅需1μl培養細胞上清液和1臺水浴鍋,不需要提取基因組DNA,不需要熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發光檢測儀等復雜實驗設備;
      (2)僅需1h出結果,簡單快速靈敏的細胞支原體檢測方法;
      (3)僅需一步操作完成整個實驗,實驗結果根據反應液顏色變化肉眼直觀容易辨別,無需電泳,避免多步操作開蓋帶來的假陽性 風險;
      (4)靈敏度遠遠高于PCR法,能夠

      詳細說明:

      一、支原體檢測試劑盒的產品特色:  

      (1)僅需1μl培養細胞上清液和1臺水浴鍋,不需要提取基因組DNA,不需要熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發光檢測儀等復雜實驗設備;  

      (2)僅需1h出結果,簡單快速靈敏的細胞支原體檢測方法;  

      (3)僅需一步操作完成整個實驗,實驗結果根據反應液顏色變化肉眼直觀容易辨別,無需電泳,避免多步操作開蓋帶來的假陽性風險;  

      (4)靈敏度遠遠高于PCR法,能夠檢測細胞培養中常見的多種支原體(豬鼻支原體、jing氨酸支原體、口腔支原體、萊氏無膽甾原體、發酵支原體、唾液支原體、人型支原體、梨支原體,占支原體污染的98%)。  


      二、支原體檢測試劑盒組成(25T):

      組分

      規格

      溶液A

      580μl

      溶液B

      25μl

      陽性對照

      15μl

      石蠟油

      700μl

      三、實驗步驟:  

      (1)待測細胞培養液上清準備  

      待測細胞在培養2-3天且融化度最好達到80%以上時取細胞培養液200μL以上體積,按照200g離心5分鐘,然后取上清液進行后續檢測(不要取到管底部50μl培養液及細胞沉淀即可);  

      (2)反應體系配制(首先將溶液A、溶液B、陽性對照、石蠟油解凍融化后立即放置于冰上)  

      將溶液A從-20℃取出,待其解凍融化后,上下輕輕顛倒混勻。根據待測細胞樣本數量在微量離心管中配制如下反應體系(反應體系配制過程在冰上進行非常重要);

      組分

      單個樣品反應體積(μl)

      樣品總數

      總體積(μl)

      溶液A

      23μl

      N

      (N+3)*23

      溶液B

      1μl

      N

      (N+3)*1

      備注:每次實驗需要1個陰性對照、1個陽性對照及由于移液器存在移液誤差,所以檢測N個樣品一般推薦配制N+3個上述反應體系  

      用震蕩器輕輕混勻,然后分裝到PCR管中(推薦使用200μl體積PCR管),每管分裝24μl上述混勻后的反應液;  

      (3)上樣(整個上樣過程保持冰上進行非常重要,特別是反應液上方覆蓋的石蠟油需要冰上預冷)  

      待測樣品:向反應管中加入1μl待測離心后培養液上清,然后用此加液槍上下移動輕輕吹打5次;  

      陰性對照:不加入任何樣品或加入1μl無菌水;  

      陽性對照:加入1μl陽性對照樣品,然后用此加液槍上下移動輕輕吹打5次;  

      然后每反應管溶液上方輕輕中加入25μl石蠟油(水浴鍋中進行反應),以防止液體蒸發導致結果不準確。加入石蠟油時請注意每次更換槍頭,防止樣品之間交叉污染。如果反應是在PCR儀中進行反應,不需要加入石蠟油。  

      (4)反應  

      將水浴鍋或PCR儀溫度設置成61℃,放入反應管,孵育60min;  

      備注:  

      1、水浴鍋實際溫度可能與設置溫度有所偏差,建議先用溫度計進行校準。實際上59-63℃反應都可以進行,但會影響檢測靈敏度;  

      2、反應產物不可開蓋,否則產生的氣溶膠會導致后續檢測假陽性的出現。建議將反應管包扎在塑料袋或手套中,丟棄到專用垃圾桶中,并及時清理;  

      3、不建議使用烘箱或金屬浴進行加熱反應;  

      (5)結果判斷  

      61℃反應60min后,立刻取出反應管,放于室溫。在光線良好的環境中觀察反應結果(建議以白紙為背景)。如果反應液仍為藍紫色,則判定為陰性;若反應液為天藍色,則判定為陽性。

      四、相關文獻  

      1、ShiyuHe,YanzhiHuang,YanlingZhao.AReverseTranscription-PolymeraseSpiralReaction(RT-PSR)-BasedRapidCoxsackievirusA16DetectionMethodandItsApplicationintheClinicalDiagnosisofHand,Foot,andMouthDisease.FrontiersinMicrobiology.2020;12(11):734-743.  

      2、AudreyJean,FlorenceTardy,OmranAllatif.AssessingmycoplasmacontaminationofcellculturesbyqPCRusingasetofuniversalprimerpairstargetinga1.5kbfragmentof16SrRNAgenes.PLOSONE.2017;12(2):e0172358.  

      3、ZohreSoheily,MohammadSoleimani,KeivanMajidzadeh-Ardebili.DetectionofMycoplasmaContaminationofCellCulturebyALoop-MediatedIsothermalAmplifcationMethod.CellJ.2019;21(1):43-48.  

      4、XinXu,XueyuWang,WenHu.AnImprovedPolymeraseCross-LinkingSpiralReactionAssayforRapidDiagnosticofCanineParvovirus2Infection.FrontiersinVeterinaryScience.2020;7(57):1629-1636.



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